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    蛋白層析柱的長短有什么區別嗎?

    發布時間:2022-04-19   點擊次數:53次
      蛋白層析柱的柱效測定是在純化實驗中非常重要的步驟,也是我們得到準確結果的保證。如果您是自己裝柱,建議您在使用前先做柱效測定來確定柱子的效果。另外,當層析柱使用過一定次數,或者發生實驗結果異常,柱子進入氣泡,超壓等問題,我們也可以對柱子進行柱效測定來判斷柱效是否正常。
     
      即使用少量的樣品流經裝填好的層析柱中,通過儀器上的檢測器檢測實驗過程,實驗結束后對洗脫峰進行分析。凝膠層析用來分離大小不同的蛋白,分子量小的通過凝膠顆粒中的孔隙路徑相對較長,分子量大的通過顆粒間隙路徑相對短些。同樣的時間,路徑短的,流的快的就先出,從而達到分離的目的。
     
      簡單的比喻,兩人賽跑,一步之內很難分勝負,但是五十米,或者一百米就可以分出先后,所以柱子長短關乎分離效果。其它層析如離子交換層析(親和層析)是靠跟配基結合能力強弱(特異性結合),來達到純化作用,裝柱的長短關系著柱載量,所以柱的長短由你的你的樣品量來決定。
     
      為了得到純度高、特異性好的抗大豆球蛋白多克隆抗體,用溴化氫活化的瓊脂糖4B純化經硫酸銨分級沉淀后的抗體,此免疫親和層析過程節省時間且操作簡單。經凝膠過濾層析的大豆球蛋白,溶脹后的填料與大豆球蛋白配基以共價鍵的形式連接,利用抗原抗體特異性結合的特點,雜蛋白隨流動相流出,再利用洗脫液將抗大豆球蛋白的目標抗體特異性地洗脫下來,用紫外檢測儀檢測非特異性洗脫峰和特異性洗脫峰。
     
      通過鑒定,多抗血清中的其它蛋白組分被非特異性洗脫掉,經濃度測定,特異性洗脫的蛋白質量濃度為0.3mg/mL,間接ELISA顯示,純化后血清稀釋128倍后顯示為陽性。間接競爭ELISA測定抗體特異性結果顯示抗體特異性得到提高??贵w被成功純化,為加工破壞大豆球蛋白致敏性亞分子結構定位奠定基礎,從而促進低致敏性食品的研發。
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