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          蛋白層析柱工作中,要進行幾個步驟呢

          發布時間:2022-01-13   點擊次數:305次
            蛋白質是生命活動的物質基礎,也是生物體內的功能性大分子。隨著分子生物學、結構生物學、生物制藥行業等研究的不斷深入,蛋白質純化成為近年來越來越熱的研究話題。
            蛋白的純化大致分為粗分離階段和精細純化階段兩個階段。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細胞成分如RNA、DNA等分開,常用的方法為硫酸銨沉淀法。精細純化階段的目的是把目的蛋白與其他大小及理化性質接近的蛋白區分開來,常用的方法有:凝膠過濾層析、離子交換層析、疏水層析、親和層析等。
            蛋白層析柱的特點:
            1:耐壓高,透明
            2:快速鎖定的適配器確保均一的流速和小的死體積
            3:特定的裝柱器保證好的柱效
            4:材質有很好的化學耐受性
            5:熱穩定的夾套可維持一定的操作溫度
            蛋白層析柱的工作流程:
            1.預處理:在吸附樹脂的生產過程中,一般采用的是工業級原料,產品沒有經過進一步純化處理,樹脂內部殘留少量單體,所以在使用之前,需用水溶性溶劑對其浸泡處理,然后用去離子水通過樹脂層,置換出水溶性溶劑離子方可投入使用。
            2.逆流洗柱:用水洗出去水離子及破碎填料,樹脂裝入后,用蒸餾水反洗樹脂層,直至出水清晰、無氣味、無細碎樹脂為止。再依次用酸堿等浸泡、沖洗樹脂層,至出水呈中性為止。
            3.水洗:水洗的主要目的是除去層析柱上所附著的渣滓。
            4.吸附:吸附操作自上而下(或自下而上)通液,可采用不同流速,以選取條件。流出液每隔一段時間取樣檢測,達泄漏點停止吸附,或多柱串聯達飽和后解吸。吸附主要是吸取料液中的渣滓或要回收物,該過程應控制料液的速度及吸附量,大孔樹脂應完全浸泡在料液里,以提高吸附效果和運行穩定性。
            5.解吸、再生:解吸操作自上而下(或自下而上)通解吸劑,單柱吸附時,解吸與吸附操作對流為佳。解吸劑沸點要低以便回收處理。
            
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